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组氨酸-琼脂糖凝胶

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分子式
分子量
产品参数 亲和层析（affinity chromatography）是一种吸附层析，配体（或配基）和相应的配基（或配体）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将配体（或配基）固相化后，就可以使存在液相中的相应配基（或配体）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。亲和层析具有高效、快速、简便等优点
性状 组氨酸-琼脂糖凝胶FF是一种将组氨酸键合在琼脂糖微球上形成的亲和层析分离介质。该产品保留了天然多糖化合物极好的亲水性及大网架结构，与生物活性大分子有很好的相容性，具有高动态吸附容量，快流速操作等特点，适用于抗体等富含共轭氨基酸残基的蛋白质、多肽的分离纯化。
1. 装柱
　　1.1 根据分离目标性质配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
　　1.2 将所取凝胶抽干，用初始缓冲液（按凝胶∶缓冲液=3∶1的比例）配成匀浆并脱气。
　　1.3 将层析柱垂直固定，底端用水或缓冲液润湿并保持一段液位。
　　1.4 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，使凝胶在柱内自由沉降，水封层析柱，沉降过夜。
　　1.5 连结好柱子顶端活动柱头，打开蠕动泵，让缓冲液用使用时操作流速流过5柱体积，再使用1.5倍的操作流速流过5柱体积，调节适配柱头，使其尽量贴近胶面，最后用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
　　注意：所有操作过程不能引入气泡，保证装胶的均匀度。
　　2. 平衡
　　将平衡缓冲液以操作流速平衡层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH等参数不变。平衡缓冲液可选择中性pH的Tris-盐酸、PBS、柠檬酸-柠檬酸钠、巴比妥、醋酸-醋酸钠等缓冲液。
　　3. 上样
　　切换转换阀进行上样，上样量根据样品的性质和层析介质的量进行选择，也可进行线性实验找到最佳上样量；样品的预处理：用平衡液配制，0.45mm微孔滤膜过滤。
　　4. 冲洗
　　用2-3个柱体积的平衡缓冲液冲洗上样后的层析柱，观察检测器的变化，直到电导、pH等参数不变，此时未吸附的组分被清洗出去。
　　5. 洗脱
　　组氨酸-琼脂糖凝胶FF的洗脱可用恒定洗脱、梯度洗脱或者阶跃洗脱，一般推荐增大盐浓度的梯度洗脱进行。
　　6. 再生
　　用平衡缓冲液按操作流速冲洗3-5个柱体积。
　　若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
　　7. 在位清洗(CIP)
　　含1mol/LNaCl的平衡缓冲液洗2个柱体积，0.1%TritonX-100洗2个柱体积，平衡缓冲液洗2个柱体积。
　　在位清洗可有效去除介质上的杂质，同时介质上的热源也可基本去除。
贮存 1. 包装：聚胺酯瓶密封包装，规格为25毫升、100毫升、250毫升和1升。 　　2. 贮存：20%乙醇，4°C冰箱保存。 　　3. 运输：4°C、常压、避光。 　　4. 保质期：5-10年。
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