操作说明: 1. 对于组织切片或蛋白质印记膜,在与辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体或其它形式的探针孵育后,用适 当洗涤液洗涤 3-5 次,每次 3-5 分钟。 2. 向 5 ml 蒸馏水中加入 250 μl 溶液 A、250 μl 溶液 B、250 μl 溶液 C,并混合均匀,即为 DAB 工作液,1h 内使用。注意:溶液 A/B/C 必须完全融化后使用。 3. 向组织切片或膜上加入适量 DAB 工作液,确保能充分覆盖样品。 4. 室温避光孵育 1-30 分钟,显色时间过长可引起本底增高,故应密切观察显色过程(一般 3-10 分钟最理想), 并在本底较浅且达到适当显色强度时以流水漂洗终止显色反应。 5. 对于组织切片或细胞样品,显色反应终止后可对其进行其他染料复染。对于膜,显色反应终止后,可以室 温晾干避光保存。 注意事项: 1.DAB 溶液应低温密封保存。如有结晶析出,应确保结晶完全溶解再行使用; 2.显色工作液应现用现配,新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色,如颜色过深,请勿使用; 3. DAB 在常温下不稳定,每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱,以免因 DAB 分解影响实验,或因渗 漏造成实验环境污染。 4. DAB 有潜在致突变作用,操作时应注意穿戴好防护用具。 5. DAB 溶液 C 成分为 H2O2,该组分易降解,必要时可自行配备。 |